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结核分枝杆菌热休克蛋白HtpG基因的原核表达与鉴定
陈竹 王维斯 韦一鸣 王雪岩 任坤雨 胡琪 余才涛 李顺 吕樵岚 陈勇
2019,17(4):
206-209,232.
摘要
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目的 克隆并表达结核分枝杆菌 HtpG 分子,并鉴定其免疫反应性。 方法 采用聚合酶链式反
应扩增结核分枝杆菌 H37Ra HtpG 基因,并克隆至 pET22b 质粒,测序筛选到重组成功的质粒。 重组质粒
pET22b - HtpG 转化大肠埃希菌 BL21(DE3),表达的 HtpG 重组蛋白通过镍柱纯化。 Western blot 鉴定表达
蛋白,并使用 HtpG 重组蛋白经 ELISA 法检测肺结核患者血清特异性抗体水平。 结果 成功构建了 pET22b
- HtpG 重组质粒; 在大肠埃希菌中表达出分子质量约 73kDa 的重组蛋白。 Western blot 鉴定该重组蛋白具
有良好免疫反应性,ELISA 法检测肺结核患者血清中存在特异性抗 HtpG 抗体。 结论 在大肠埃希菌内成功
表达 HtpG 重组蛋白,为将该蛋白用于结核免疫诊断试剂的研制奠定了基础。
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