热带病与寄生虫学 ›› 2019, Vol. 17 ›› Issue (4): 199-202.

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改良SDS法提取书虱总RNA的效果评估

卢莹 黄文雨 黄梦蕊 王波 陈潜 刘啸 汪书然 孙恩涛   

  1. 241002 安徽芜湖市, 皖南医学院检验学院
  • 出版日期:2019-12-10 发布日期:2020-01-21
  • 基金资助:

    国家自然基金项目(31870352);皖南医学院大学生科研基金项目( WK2018S49);安徽省大学生创新创业项目(201810368137)

  • Online:2019-12-10 Published:2020-01-21

摘要: 目的 建立有效的提取书虱总 RNA 的方法。 方法 分别采取改良 SDS 法、传统 SDS 法和 TRIzol 法提取书虱总 RNA;采用 1% 琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 完整性;核酸蛋白分析仪测定 RNA 纯度和浓度,纯 度以 A260 /A280 、A260 /A230 表示,通过浓度推算产率;以 β - actin 为目的基因,RT - PCR 法初步评价 RNA 提取 效果。 同时,用改良 SDS 法探究不同数量的书虱总 RNA 提取效果。 结果 改良 SDS 法产率最高。 经方差分 析,3 种方法的浓度差异具有统计学意义(F = 17. 874,P < 0. 001),经 SNK 法每组互比,改良 SDS 法浓度较 高,其次为 TRIzol 法,传统 SDS 法较低。 TRIzol 法未见 28s 条带;传统 SDS 法有 gDNA 污染;而改良 SDS 法 电泳结果显示 28s、18s 条带完整清晰,条带之间无明显弥散现象,说明提取的 RNA 完整性较高。 3 种方法 提取的 RNA 经 RT - PCR 均能扩增出阳性条带。 30 只书虱即可获得高质量 RNA,满足后续实验要求。 结论 改良 SDS 法操作简单、成本低、耗时少,适于书虱总 RNA 的提取。

关键词: RNA 提取, 改良 SDS 法, 书虱