热带病与寄生虫学 ›› 2014, Vol. 12 ›› Issue (1): 3-6.doi: 10.3969/j.issn.1672-2302.2014.01.002
刘志明,姜玉新,李朝品*
Liu Zhiming, Jiang Yuxin, Li Chaopin
摘要: 目的 优化粉尘螨变应原Der f2和Der f3基因改组条件,以期获得粉尘螨变应原融合突变基因。方法 RT-PCR方法扩增粉尘螨变应原Der f2和Der f3基因,用DnaseⅠ分别酶解Der f2和Der f3基因10、15、20、25、30min;酶解相同时间的Der f2和Der f3基因两两混合,采用DNA shuffling技术对粉尘螨变应原Der f2和Der f3基因进行重组,电泳检测重组子。结果 以Der f1 F和Der f1 R、Der f2 F和Der f2 R为引物分别在酶切10min、15min、20min、25min均可扩增出清晰条带;以Der f2 F和Der f3 R为 引物在酶切10min、15min和30min的模板中亦出现PCR片段。结论 通过多种条件的组合,可获得多个粉尘螨变应原Der f2和Der f3基因间的融合基因,为大规模制备高效,低价的哮喘疫苗奠定基础。